第三次十字军东征使圣地耶路撒冷蒙受了巨大灾难。为了能终止无休止的纷争，刺客集团计划展开行动来迫使交战双方罢手。玩家在游戏中将扮演刺客集团的主要人物艾西欧。奥迪托里。达。费伦兹，他是一名佛罗伦萨贵族青年。由于被卷入圣殿骑士团的一场阴谋，他的家人被悉数处死。在得知自己其实是刺客家族的后人之后，他便开始了奔走整个意大利的复仇行动。担负起改变整个历史以及拯救无数人命运的重大使命。